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论文题目：小樱桃文心兰试管苗生根与移栽研究
一、立题意义及国内外的研究现状与存在问题，主要研究内容及拟解决的关键性问题(含文献综述)
1. 本项目研究的意义
文心兰又名跳舞兰、金粉蝶兰、瘤瓣兰，属兰科文心兰属[1]，大多数为气生种，有部分半气生种和地生种，原产墨西哥、西印度群岛、巴西等地。它是兰科中最大的属之一，现已有的品种超过700个。
近年来，作为盆花和切花的生产量均急剧增加。同蝴蝶兰及大花蕙兰一样，作为主要的洋兰生产种，市场需求量越来越大，发展前景十分可观。文心兰同其他兰科植物一样,按照传统的分株繁殖方法,繁殖系数较低,繁殖速度慢、周期长[2]，尤其对国外引进的优良品种，难以迅速占领市场、满足需求，严重影响了我国文心兰生产的健康发展。常规繁殖中常遇到的问题：分株繁殖速度慢，新品种跟不上市场的需求;种子繁殖条件苛刻，必需有菌根才能萌芽;此外，传统繁殖病毒感染严重[3]，降低商品的价值。而组织培养可以解决具有可以生产无病毒的优质苗木、经济方便、效率高等优点，正好弥补传统育苗的不足。
2. 本项目研究在国内外的研究现状
文心兰自20世纪初被发现以来，发展很快，品种由原来的野生种逐渐演变成很多杂交品种。由于遗传性状相近，人工进行属间杂交从而得到野猫文心兰、白仙文心兰等[4]。文心兰近年来成为继蝴蝶兰、大花蕙兰之后花卉市场上又一重要的洋兰，受到国内外花卉市场的青睐。为此，文心兰的栽培都受到世界各国广泛的重视，其中泰国、新加坡、马来西亚的生产规模最大[5]。我国文心兰的生产比较晚，从20世纪90年代才开始在广东、福建、海南和云南等地，但是与国外相比差距还挺大的。
自1960年Moral[6]开创兰花茎尖培养技术以来，兰花的组培快繁得到了迅猛发展。国内外不少学者对文心兰组织培养的研究已经取得了很大的成就,主要集中在以下几个方面。首先是对外植体的选择：国外的Kundson、Bertch、Fast等对此都有深入的研究。国内的陈兴贻1989年报道了文心兰茎尖及花穗的离体培养结果[7]。其次，基本培养基的选择：2001年何松林等以MS[8]为基本培养培养利于不同外植体的培养，而原球茎的增殖则以1/2MS[9]为宜。潘学锋则认为改良的KC较适合原球茎的增殖[10]。目前，学术界对最佳基本培养基没有达成一致的认识。再次，就是不同激素浓度及比例对文心兰组织培养的影响。2005年崔广荣、刘云兵、何玉华等通过试验得出BA和NAA比KT(激动素)和Ad(腺嘌呤硫酸盐)更适合文心兰试管苗的增殖[11]。多数研究者都认为BA和NAA利于文心兰的增殖，但在配比方面意见却不一致。最后就是不同添加物对文心兰组织培养影响的研究。目前，大多数学者认为椰乳对文心兰增殖和分化有促进作用。2000年陈发菊等指出椰乳对文心兰丛生芽分化有明显促进作用，活性炭降低激素和椰乳的作用[12]。小樱桃文作为一个国外引进的新兴品种，目前国内的研究比较少。本实验室的万学锋已研究过小樱桃文心兰原球茎增殖与植株再生[13]。
3.本项目研究的主要内容及拟解决的问题
本试验是在万学锋的基础上进行研究，其主要内容是对小樱桃文心兰生根、壮苗培养基的筛选以及小苗移栽基质的选择。拟解决的问题是：通过试验，改变激素的浓度和比例，寻找适合生根、壮苗的培养基，并适量添加有机添加物，观察其对生根、壮苗的影响。通过移栽试验，找出适合小樱桃文心兰生长的基质配比。
参考文献:
[1] 黄泽画.兰花彩谱[M].广东：汕头大学出版社，2005: 103.
[2] 陈菁瑛，蓝贺胜，陈雄鹰.兰花组织培养与快速繁殖技术[M].北京：金盾出版社，2004: 107-115.
[3] 李文玲，翟林邵，刘艺平.文心兰原球茎诱导技术的研究[J].河南科学，2004, 22(3): 360-361.
[4] 段左俊，白旭华，文心兰的研究现状[J].热带林业，2006, 34(1): 24-26.
[5] 王意成，王翔，姚欣梅.兰花欣赏与养护[M].南京：江苏科学技术出版社.2003: 61.
[6] Morel G M.Producing virus free Cymbidium[J].Am Orchid Soc Bull，1960, 29: 495-497.
[7] 陈兴贻.文心兰的组织培养[J].植物生理学通讯，1989, (5): 49.
[8] 何松林，十鸟三和子，孔德政等.基本培养基及凝固剂对文心兰试管苗生长发育的影响[J].北京林业大学学报，2001, 23(1): 29-31.
[9] 何松林，十鸟三和子，王献等。不同基本培养基及培养方式对文心兰原球茎增殖的影响[J].华北农学报，2001, 16(1): 88-91.
[10] 潘学锋，王日暖，莫海.文心兰茎尖离体培养研究[J].热带林业，2001, (12): 145-151.
[11] 崔广荣，刘云兵，何玉华等.不同细胞分裂素对文心兰试管苗增殖的影响[J].中国科技核心期刊，2005, (2): 37-40.
[12] 陈发菊，陈菽，万小明.活性碳和椰乳对文心兰离体芽尖培养的影响[J].实用医学进修杂志，2000, 28(4): 219-221.
[13] 万学锋.小樱桃文心兰的原球茎增殖与植株再生研究初探[J].福建：福建农林大学，2006: 1-9(整理中)
二、本课题的主要研究内容和方法、步骤、预期目的
1. 研究的主要内容：
(1)小樱桃文心兰原球茎增殖;
(2)诱导小樱桃文心兰的生根;
(3)小樱桃文心兰壮苗的研究;
(4)小樱桃文心兰的小苗移栽;
2. 方法及步骤
(1)培养基的配制
基本培养基为1/2MS，琼脂为7克/升，蔗糖为20克/升，pH值为5.8，生长激素为BA，NAA，IBA(浓度单位为mg/L，下同)，附加物为椰乳，活性炭。
(2)培养条件
接种材料保持在252℃，光照时间12h/d，光照强度1000-1500Lx。经常去试验室去检查有没有污染，要及时清理，以免造成更多的污染，发现污染的要及时找出原因，作出调整。
(3)原球茎增殖培养基的筛选
切取无菌材料中的小叶片，将其供试验的原球茎切割成约3.3mm3的接种块，分别接种在不同浓度的BA和NAA的培养基中，进行增殖培养，60天后对原球茎生长的增殖情况进行观察并统计分析数据。
(4)诱导生根，筛选适宜的培养基
将继代培养出来的幼苗切取单株，带有2～3片叶子，株高1cm，转至生根培养基中，观察幼苗的生根情况，包括根数和根的长度，40天后进行统计并分析数据。
(5)壮苗
从已经诱导出根的幼苗中筛选出株高2cm，带有3～5片叶子的幼苗，移至壮苗的培养基中，观察幼苗的生长情况：叶片的数目、根的数目、根的长度，40天后进行统计并分析数据。
(6)小苗移栽
当试管苗长至3～4cm高，叶子有5～7片，根有2～3条，长度约2～3cm时，就可进行移栽，打开瓶盖先进行锻炼2天左右，以增强试管苗对室外环境的适应能力。小苗移栽后放入室温中，观察其生长状况并记录下来。主要的基质有：珍珠岩、蛭石、木屑、苔藓、树皮、椰糠等。
3.预期目的
本次试验拟解决生根、壮苗基本培养基的选择以及移栽基质的筛选，寻找最适合小樱桃文心兰生活的基质。
三、研究工作总体安排及具体进度
20xx年10月至20xx年5月：文心兰组织培养研究现状等文献的查阅，收集文献资料和试验材料;
20xx年6月至10月：进行小樱桃文心兰原球茎的增殖、幼苗的生根，并统计数据;
20xx年11月至20xx年2月：进行小樱桃文心兰壮苗、移栽试验，并记录数据;
20xx年3月至4月：分析收集到的数据，进行论文初稿撰写和论文的修改;
20xx年5月：论文定稿、打印、答辩。
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